第一篇：中药提取方法
综述中药提取方法
摘要
以中药提取方法的本质和影响提取作业的因素为理据，分析国内中药厂提取方法 关键词
中药提取方法 1前沿
近年来有关中药提取方法的论述有很多，然而有效成分的提取率仍然是现今国内中药制药工业现代化的瓶颈。尽管近年来国内在中药提取生产中推出了一些新工艺，如超声场强化提取、微波提取、超临界流体提取等，但当下的主流仍是浸提技术。浸提技术是应用溶剂提取固体原料中某一或某类成分的提取分离操作，又称固液萃取。目前在中药生产过程中，常用的中药浸提方法有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法等。
面对众多中药提取方法如何抉择是一个复杂的问题，因为它牵涉到生产设备和生产条件等许多因素。加上如今中药提取的规模较大，尤其考虑到连续生产，即使在实验中取得成果，在实际情况下还要经过长时间的实践检验。还有前面提到过的提取新工艺，其提取物往往是化学结构明确的物质，与传统中药生产完全是两回事，所以生产传统中药的厂家下不了决心去尝试新工艺，生产者情愿随大流，以避免风险。
提取方法的不同，提取等量有效成分所需原料和能源也不尽相同，资源和能源对世界经济和人类生存环境的影响越来越被重视。可持续发展经济和资源节约型社会的概念已经被全世界广泛认同，中国也不例外。在市场竞争激烈异常的今天，生产成本的控制就是企业的生命，而对世界能源价格上涨的现实，生产者应该节约每一滴水，每一度电。中药生产厂家必须努力挑选出最好的中药提取方法，改变目前中药提取效率低、高能耗、高污染所造成的负面影响。2选择原则
和所有的工程项目一样，选择中药提取方法必 要考虑的条件也是：被处理物料的性质、数量，产品的价值操作人员的技术水平，现实的设备安装场地，生产成本的控制，投资的预算。所追求的目标也是最高的投资回报率，最低的能耗，最简单的操作，最理想的提取率。降低生产成本，提高产品质量，从而提升本企业的市场竞争力。舍此不会有 良好的后果。3中药提取本质
中药提取本质上是一种固液萃取作业，任何化工原理教科书和化工手册对固液萃取的机理都有详尽的阐明。为了便于分析国内中药厂现有提取装置的状况，有必要将其与中药提取有关的结论摘录于此。（1）固液萃取的速度取决于二相接触介面的面积和吸附力，溶质扩散到介面的距离，溶剂的粘度和扩散系数、对溶质的选择性，萃取的温度、压力。
（2）固液萃取的萃取率取决于萃取时间、级数（同一份固相被萃取的次数）和溶剂的数量。（3）在多级萃取作业中，固液萃取的级效率取决于固相底流的反混量，以及固液二相接触的均匀程度。
（4）萃取率既定时，多级固液萃取的溶剂使用量取决于萃取过程的形式：并流、错流或逆流。（5）所谓并流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都被同一份溶剂萃取，液相的移动方向与固相在级间移动的方向相一致的作业方式。实际上是一种移动的单级萃取作业。为了保证最终的萃取推动力，萃取液成品的浓度必须相当低，所以整
个萃取过程的溶剂需用量相当大。
（6）所谓错流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都使用新鲜溶剂进行萃取，每一级都要将固液二相分离。然后把这些浓度逐次降低的各级提取液混合在一起作为成品。
（7）所谓逆流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都是被来自下一级的萃取液所萃取，固液二相的移动方向是相逆的。新鲜的液相溶剂萃取最后一级固相渣滓，而最浓的萃取液成品萃取新鲜的固相物料。不仅可用最少的溶剂量维持各级萃取所需的推动力，而且可以获得浓度最高的萃取液成品。4中药提取方法
回流法
回流法系指用乙醇等挥发性有机溶剂浸提药材成分，浸提液被加热，溶剂馏出后又被冷凝流回浸出器中浸提药材，这样周而复始，直至有效成分提取完全的方法。该法由于浸提液受热时间较长，故不适用于受热易破坏的药材成分的浸出。常用设备为多功能提取罐、索氏提取器。
滤过分离法
滤过分离法系指将混悬液通过多孔的介质（滤材），固体微粒被截留，液体经介质孔道流出，使固-液分离的方法。常用的滤过方法与设备如下所述。
（1）常压滤过
系指常压下滤过的操作。常以滤纸或脱脂棉作滤过介质，常用滤器为玻璃漏斗、搪瓷漏斗、金属夹层保温漏斗等。
（2）减压滤过
系指抽真空下滤过的操作。常用的滤器如布氏漏斗（铺垫滤纸或纸浆滤板）、砂滤棒（外包滤纸或丝绸布）、垂熔玻璃滤器（包括漏斗、滤球、滤棒）等。
（3）加压滤过
系指加压下滤过的操作。例如板框压滤机，是由许多块“滤板”和“滤框”串连组成，适用于黏度较低、含渣较少的液体加压密闭滤过。
（4）薄膜滤过
系指以薄膜为滤过介质，按薄膜所能截留的微粒最小粒径或相对分子质量，达到的滤过操作，可分为微孔滤膜滤过（微滤）、超滤、反渗透等。
微滤是指以微孔滤膜为滤过介质进行的滤过操作。微孔滤膜滤过具有以下特点：滤膜质地薄（0.1～0.15mm），孔径比较均匀，孔隙率高，故滤速快；滤膜对料液的吸附少；滤过时无介质脱落，对药液无污染。微孔滤膜的孔径范围为0.025～14μm，生产中主要用于精滤，如注射液的滤过。0.22μm以下孔径的滤膜可以滤除细菌。
超滤是指利用具有不同分子量截留值的薄膜作滤过介质，溶剂和小分子溶质可通过滤膜，大分子溶质被滤膜截留。所以，超滤是在纳米（Bin）数量级选择性滤过的技术。具有非对称结构的超滤膜孔径为l～20nm，主要滤除5～100nm的微粒。可用于中药注射剂的精制及除菌；蛋白质、酶、多糖类药物溶液的超滤浓缩等。
水提醇沉法
水提醇沉法（水醇法）系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达不同含醇量，某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。一般操作过程是：将中药水提液浓缩至1︰1～1︰2（ml︰g），（溶液：溶质）药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。操作时应注意以下问题：①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。
水蒸气蒸馏法
水蒸气蒸馏法系指将含有挥发性成分的药材与水共蒸馏，使挥发性成分随水蒸气一并馏出，经冷凝分取挥发性成分的浸提方法。该法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的药材成分的浸提。水蒸气蒸馏法可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法。为提高馏出液的浓度，一般需将馏出液进行重蒸馏或加盐重蒸馏。常用设备为多能提取罐、挥发油提取罐。
渗漉法
渗漉法是将适度粉碎的药材置渗漉筒中，由上部不断添加溶剂，溶剂渗过药材层向下流动过程中浸出药材成分的方法。渗漉属于动态浸出方法，溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液。适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取。但对新鲜的及易膨胀的药材、无组织结构的药材不宜选用。该法常用不同浓度的乙醇或白酒做溶剂，故应防止溶剂的挥发损失。
（1）单渗漉法
系指用一个渗漉筒的常压渗漉方法。操作过程是：①粉碎药材：粉碎度应适宜，一般以粗粉或最粗粉为宜。过细易堵塞；过粗不易压紧，溶剂消耗量大，浸出效果差。②润湿药粉：药粉应先用适量浸提溶剂润湿，使之充分膨胀，避免在渗漉筒中药粉膨胀而造成堵塞。③药粉装筒：渗漉筒底部装假底并铺垫适宜滤材，将已润湿膨胀的药粉分次装入渗漉筒，应松紧适宜，均匀压平，上部用滤纸或纱布覆盖，并加少量重物，以防加溶剂时药粉浮起。④排除气泡：打开渗漉液出口的活塞，从药粉上部添加溶剂至渗漉液从出口流出，溶剂浸没药粉表面数厘米，关闭渗漉液出口。⑤药粉浸渍：一般提渍24～48h，使溶剂充分渗透扩散。⑥渗漉：打开渗漉液出口接收漉液，漉液流出速度以1000g药材计算，通常每分钟1～3ml.渗漉过程中应不断补充溶剂。使溶剂始终浸没药粉。
（2）重渗漉法是将多个渗漉筒串联排列，渗漉液重复用作新药粉的溶剂，进行多次渗漉以提高渗漉液浓度的方法。重渗漉法溶剂利用率高，浸出效率高。渗漉液中有效成分浓度高，可不必加热浓缩，避免了有效成分受热分解或挥发损失。但所占容器多，操作较麻烦。主要设备为渗漉筒。
5结束语 由于条件限制，笔者没有亲自尝试文中提到的部分提取方法，这篇文章只是介绍下当今中药提取的主要方法而已。
第二篇：中药提取车间建议
中药提取车间建议
一、酒精库（危险品库）
1.要求：防雷、防爆，距离锅炉房大于20米，距离仓库及车间大于15米；
2.设置：设西南角；
3.优点：距离提取车间近，减少运输管路，并且为下风向；
4.缺点：距离居民建筑近，存在安全隐患。
二、中药仓库
1.要求：是否设置阴凉库（如：阿胶贮藏）？是否设置净药库（如：饮片贮藏）？
2.设置：在提取车间北面，与现有仓库平行设置。
三、需增加内容
1.增加冷库，设置在“流浸膏装桶”间附近，或仓库内；
2.增加炒药机（设置排烟装置），放在烘药间；
3.增加一贮罐、一冷浸罐，且贮罐尽可能设置在钢架平台的下面；
4.是否在提取车间洁净区增加称量配料间？
5.是否增加消毒液的配制间？
6.是否在“原料药精烘包”间设置洁净区洗衣房？
7.尽可能增加提取间的面积，并预留一提取罐、喷雾塔的位置，其中喷雾塔设置在提取间，出料斗设置在洁净区；
8.尽可能增加净药库的面积，其中是否设置阴凉措施？
四、需合并的内容
1.合并一、二办公室及“备品”“饮水房”间；
2.合并空调间，且尽可能距离洁净区近点；
3.合并“真空泵”间。
五、需取消的内容
1.取消“内包材外清间”，物料可从“中转间”走；
2.取消“原药材暂存间”、“中间站”（或取消“中转间”，二者留一）。
六、需移动改变的内容
1.提取间改在新建车间的南部；
2.“原药材暂存间”由30万级改为10万级；
3.“中检”间可否移在非洁净区？
4.“除尘”间可否移在非洁净区？
5.“更洁净鞋区”是否须要在洁净区？
七、尽可能缩小洁净区的面积，特别是更衣室的面积。
八、纯化水（注射用水）的贮藏（制备）。是否设置污水处理系统？
第三篇：中药提取工艺研究发展
综述
中药提取工艺研究发展
临床药学2022-1班 百合提努尔·胡达拜地 学号：*** 摘要:中药提取工艺路线设计直接影响到中药制剂的有效安全。本文综合分析了当前中药提取工艺设计思路，并经通塞脉微丸中间提取物制备工艺的比较研究，提出中药提取工艺设计应以复方整体作为研究对象，按照传统汤剂制备方法制备提取物，进而针对复方组成药物所含有的活性成分类型，选择性采用适宜的分离精制方法，逐步排除无效物质、非疗效相关物质，最终获得能够保持原方疗效和安全性的中间提取物。
[1] 关键词: 中药;提取工艺,研究发展
前言:提取是从药材原料中分离有效成分的单元操作，直接关系到产品有效成分的含量，影响内在质，量、临床疗效、经济效益及GMP的实施。中药制剂的研究和生产从传统制剂原粉成型的丸、散到浸提型制剂如颗粒剂、浸膏片、胶囊、口服液、注射液等的兴起和发展，是半个世纪来中药制剂进步的特征，应属于从传统制剂进入改进制剂的时期行归纳概述。基本内容：
[2]
。本文对近年来传统与现代中药提取工艺进1.传统工艺
传统工艺包括浸渍法, 水提醇沉工艺,水煎煮法, 渗漉法, 回流法, 水蒸汽蒸馏法。下面我们简单的介绍一下几个传统工艺：
1.1 浸渍法
浸渍法按提取的温度和浸渍次数可分为：冷浸渍法、热浸渍法、重浸渍法。浸渍法适用于粘性药物、无组织结构的药材、新鲜及易于膨胀的药材、价格低廉的芳香性药材。不适于贵重药材、毒性药材及高浓度的制剂。
1.2 水提醇沉工艺
中药水提液经浓缩后在常温或低温下加入乙醇进行醇沉，乙醇既作为溶剂来溶解浓缩液中的有效成分，又作为沉淀剂来沉淀某些杂质。
1.3 水煎煮法是在草本植物中加入适量的水，然后加热至一定温度并保持一定时间后滤出煮液的方法。该方法不仅简便易行，而且能煎出大部分有效成分，是最常用的提取草本植物中活性成分的方法之一煎药机优于传统煎煮法。杨璐璐等
[4]
［3］。
发现用GNG 中药抽出机比直火加热法和
[5]蒸气煎药法制备汤剂的总固体含量高出2倍以上, 且保质时间长。张晓燕等发
[6]现中药抽出机制备的槐花散汤中芦丁含量明显大于常压直火煎煮法。梁文能等发现煎药 机煎煮的黄连解毒汤中黄芩苷的含量高于传统煎煮法。
2.新工艺
新工艺包括：微波萃取, 超临界流体萃取（SFE）, 酶法提取, 超声提技术, 罐组式动态逆流提取工艺, 半仿生提取法 2.1 超滤
超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术[7]。
2.2 超临界流体萃取超临界流体萃取(supercr itical fluid ex traction, SFE)技术是以超临界流体CO2、NH 3、H 2O、C2H 5OH、C2H6等代替常规有机溶剂, 在超临界状态下, 将超临界流体与待分离的物质接触, 通过控制不同的温度、压力以及不同种类及含量的夹带剂, 使超临界流体有选择性的把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来2.3 生物酶解技术
[8]。
生物酶是一种能力巨大的催化剂, 酶可以作用于污染物质中复杂的化学链, 将其降解为小分子有机物或CO2、H2O 等无机物, 有机物的处理则通过酶反应形成游离基, 游离基发生化学聚合反应生成高分子化合物沉淀, 经过滤即可除去。与其他微生物处理方法相比, 酶技术的应用具有催化效率高、反应条件温和、对设备要求低、反应速度快等优点2.4 半仿生提取法
[9]。
半仿生提取法(semi2bionic extraction method , SBE)是从生物药剂学的角度,模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理,运用于经消化道给药的中药制剂的一种新的提取工艺。将中药原料分别用近似胃和肠道的酸碱水溶液提取2～3 次,即先用一定pH 的酸水提取,继以一定的pH 的碱水提取,提取液分别滤过,浓缩,制成制剂。酸碱法是针对单体成分的溶解度和酸碱度有关的性质,在溶液中加适量的酸或碱,调节pH 值至一定范围,其目的是使单体成分溶解或析出。
近几十年来，中草药的生产实现了一定程度的机械化和半机械化。传统中药往往被认为有效成分含量低、杂质多、质量不稳定，因此用药多建立在经验的基础上，不能与现代医学接轨。为解决这个问题，中药必须走提取和纯化的道路
[10]。
1.玉屏风总多糖水提醇沉工艺条件优化
目前关于YTP 醇提水提工艺条件的优化已经见报道
[12-13]，该工艺流程复杂，要消耗大量的乙醇，提取次数多，运行费用高，不利于产业化。采用水提醇沉法提取玉屏风总多糖，以玉屏风总多糖得率为考察指标，通过正交试验得出影响提取效果诸因素的主次关系依次是醇沉最终浓度、料液比和提取时间。根据正交试验得出最佳工艺条件为料液比1∶ 12，在90 ℃下浸提时间为1.5 h，90% 乙醇沉淀。据此工艺条件进行提取可使YTP 得率达到4.31%2.数字化超声连续中药萃取装置的应用
数字化超声连续中药萃取装置的特点：与常规提取工艺相比，数字化超声连续中药萃取装置具有如下特点：（1）对萃取温度、时间、超声频率及功率、进料及进液速度等实现数字化动态自动控制，实现了远程操作控制常温常压超声连
[11]
。续萃取生产；（2）设计螺旋式物料输送机构，实现连续批量自动化生产，自动上料，自动进料，自动出渣，降低了生产成本，实现了自动控制；（3）萃取效率高；（4）超声萃取适应性广，不受成分极性、分子量大小的限制，适用于绝大多数种类中药材和各类成分的提取；（5）萃取药液杂质少，有效成分易于分离、纯化。萃取成本低，综合经济效益显著
[14]。
目前我国中药材提取工艺主要为静态提取，药材的提取停留在单台提取的水平，效率较低，属于间隙操作，劳动条件较差，与医药GMP 要求相差甚远，和世界先进的天然药物提取水平差距巨大。
[15]
结论：综上所说，虽然在中药提取工艺上有很大的进步，提取技术趋向于现代化，全自动化，但还需要更进一步的发展，作为医学生我们应该认真勤奋学习中药提取工艺技术，为我们国家的医学发展事业付出一份努力而奋斗。
参考文献：
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第四篇：DNA提取方法
各种DNA提取方法 一，基因组DNA提取方法
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法超声波法研磨法冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等 试验步骤：
1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。
3、加入5mlDNA提取缓冲液，(10mmol/LTris-cl0.1mol/LEDTAo.5%SDS)混匀。
4、加入25ul 蛋白酶K使终浓度达到100ug/ml 混匀，50℃水浴3h
5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相
6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL混匀，冰浴，10min.。7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm离心10min。弃上清。
8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。9、12000r/min室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。二，外周血DNA提取技术 分离外周血白细胞提取方法： 试验步骤：
1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml 离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml 溶血液，摇匀，冰浴15min。6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80℃冻存。试验要求：
血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
三，氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA： 试验试剂： Ligsisbuffer：
133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。ACD抗凝剂：__________柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最后加
灭去离子水至100ml，高压灭菌 试验步骤：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。以4000rpm，离心5min。弃上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。以6000rpm，离心5min。
3、彻底弃去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解细胞），混匀置于37℃，水溶1h。
4、加入8μl 的蛋白酶K，颠混，37℃过夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。
5、每管加入450μl 饱和酚（取溶液下层）缓慢摇晃10min，以5500rpm，离心15min。
6、取上清，每管加入250μl 饱和酚和250μl氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。
7、取上清，每管加入500μl 氯仿－异戊醇，摇匀10min，以5500rpm，离心15min。
8、取上清，每管加50μl 的3M的NaAC＋，适量无水乙醇（预冷）至满，摇匀放入-20℃保存2h以上。
9、以12000rpm，离心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，离心5min，去上清，50－60℃干燥。
10、加入50μl 灭菌去离子水，转弹，混匀。四，NaI提取法提取外周血白细胞基因组： 实验步骤：
1、取外周抗凝血（全血）100ul 于eppendorf管中，12000rpm离心12min。
2、弃上清，加双蒸水200ul 溶解，摇匀20s。
3、混匀后加6MNaI溶液200ul，摇匀20s。
4、加入氯仿/异戊醇（24：1）400ul，边加边摇，摇匀20s，12000rpm离心12min。
5、取上层液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍体积异丙醇，摇匀20s，室温放置15min，静置后的反应体系15000rpm离心12min，使沉淀紧贴eppendorf管壁。
6、弃异丙醇，加70％乙醇1ml（不振动），以15000rpm离心12min。
7、弃乙醇，敞开eppendorf管盖，烘干（37℃恒温箱）后，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。
五，常用的外周血白细胞基因提取方法： 试验原理：
苯酚/氯仿提取DNA是利用岘_Q______酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA 从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl 存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。试验步骤：
1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml 离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。
2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml 蛋白酶K0.2ml 至终浓度为100-200ug/ml 上下转动混匀，液体变粘稠。50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。
3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。重复一次。
4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5ml 离心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm离心5min。洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul 溶解DNA置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。六，真核细胞DNA的制备
一般真核细胞基因组DNA 有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下两个原则：
1、防止和抑制DNase对DNA的降解。
2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。试剂准备：
1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0)。
2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl。
3、裂解缓冲液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。4、20%SDS 5、2mg/ml 蛋白酶K
6、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、无水乙醇、75%乙醇 试验步骤： 材料处理：
1、新鲜或冰冻组织处理：
1)取组织块0.3-0.5cm3剪碎，加TE0.5ml，转移到匀浆器中匀浆。2)将匀浆液转移到1.5ml 离心管中。
3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混匀。4)60 C水浴1-3hr。
2、培养细胞处理：
1)将培养细胞悬浮后，用TBS洗涤一次。2)离心4000g 5min，去除上清液。3)加10倍体积的裂解缓冲液。4)50-55 C水浴1-2hr。DNA提取：
1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min。
2、离心5000g 10min，取上层水相到另一1.5ml 离心管中。
3、加等体积饱和酚，混匀，离心5000g 10min，取上层水相到另一管中。
4、加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g 10min，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。
5、加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5000g 10min，取上层水相到另一管中。
6、加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。
7、待絮状物出现后，离心5000g 5min，弃上清液。
8、沉淀用75%乙醇洗涤，离心5000g 3min，弃上清液。
9、室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。七，细菌DNA的提取方法 针对一些不易于提取的细菌的方法: 试验试剂：
抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl 10MliCl
2MliCl
DEPC-water（抑制RNA酶活性）
3MNaAc(pH5.2)
96%乙醇
70%乙醇 试验步骤：
1、抽提缓冲液65℃预热__________。
2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。
3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12000rpm，离心10min。
4、取上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12000rpm，离心10min。
5、重复再作一次步骤4。
6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。
7、以2000rpm，离心10min。
8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。
十，较为常用的细菌DNA提取方法： 实验步骤：
1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。
2、取1.5ml 培养物12000rpm离心2min。
3、沉淀中加入567ul 的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30ul10%SDS和15ul 的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4、加入100ul5mol/LNaCl 充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl 溶液，混匀后再65℃温育10min。
5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。
6、沉淀用1ml 的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇． 十一，真菌DNA提取总结的两种方法： 第一种方法： 试验步骤：
1、取真菌菌丝0.5g在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。
3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。
4、以4℃，1000rpm，离心5min。
5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10000rpm，离心5min。
6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀混匀静置约30min。
7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀用75%乙醇反复漂洗数次再用无水乙醇漂洗1次吹干，重悬于500ulTE中。
8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。
9、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10000rpm，离心5min。
10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc2.5 倍体积的无水乙醇-70℃沉淀30min以上。
11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干溶于200ulTE中，-20℃保存备用。DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。第二种方法： 试验步骤：
1、真菌菌丝0.5-1g在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min期间混匀2-3次。
3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。
4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10000rpm，4℃离心5min）。
5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇混匀静置约30min。
6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀用75%乙醇反复漂洗数次再用无水乙醇漂洗1次吹干，重悬于500ulTE中。
7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。
8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10000rpm，离心5min。
9、取上清，1/10V3MNaAc2.5V体积的无水乙醇-70℃沉淀30min以上。
10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干溶于200ulTE中，-20℃保存备用。十二，石蜡包埋DNA提取试验方法 试验原理：
从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤，是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz 等（1985）最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术，是用机械的方法破碎组织，切除多余的石蜡，进入含SDS和高浓度蛋白酶K（１mg/ml）的提取缓冲液加温孵育，然后进行苯酚和氯仿抽提。所得DNA虽不完整，但可被限制性内切酶切割，因而适于点杂交，印迹杂交等多种分了生物学实验。Dubeau 等（1986）在上述方法上作了改进。首先通过组织切片和二甲苯和脱蜡，保证了组织的完全破碎，使细胞与消化液充分接触，使DNA释放和蛋白去除更加完全；其次通过两步消
化的方法，将不适于做分子杂交的降解的DNA小段去除，仅保留那些可螺旋化的完整的DNA分子，从而提DNA质量，适于做Sorthern印迹杂交分析。试验试剂：
配方：3mol/lNacl，0.3M柠檬酸三钠 2H2O，用HCL调PH值至7。0石蜡消化液：150nmol/lNacL：15mmol/l 柠檬酸钠，1%SDS，PH7.0。
试验步骤：
1、取蜡块切片15-20张（8μm），置于eppendorf管中，加入1ml 的二甲苯，37℃作用3h，以10000rpm，离心3min，倾去二甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。如果仍有蜡质残存，需继续脱蜡。
2、剃度酒精水化：加入100%乙醇1ml，室温下放置30min，以10000rpm离心3min，去上清；再依次分别加入95%；75%；50%的乙醇重复上面的步骤。
第五篇：中药提取委托生产的申请
关于****颗粒中药提取委托生产的申请
**省食品药品监督管理局：
****药业有限公司是具有合法资质的药品生产企业，于2022年4月6日获得GMP证书(*K202200**号)，有效期至2022年4月5日。
该公司的****颗粒（批准文号为：国药准字Z202200**；规格为：每袋装5g；质量标准为：YBZ009220**）是具有合法生产资质的产品。由于公司中药提取生产车间规模较小，不能满足生产需求，因而申请委托加工****颗粒的中药提取，年生产量1200万袋左右，暂定委托加工时间为2年。
经过现场考察，****药业集团股份有限公司完全具有中药提取委托加工条件且愿意接受我公司的委托加工，我公司负责完成该产品的制粒及后续工序的生产。
特此申请！
****药业有限公司
2022年 04月06 日
